Verificación de métodos de referencia y métodos alternativos validados (II)

La serie de la norma ISO 16140 se ha visto ampliada en 6 partes dada la necesidad de abordar las diferentes vías de validación o verificación de los métodos de ensayo, dar cumplimiento a la norma ISO/IEC 17025 (7.2.1.5) y armonización de criterios.

ISO 16140/ UNE-EN ISO 16140 «Microbiología de la cadena alimentaria -Validación del método»:
Parte 1: Vocabulario
Parte 2: Protocolo para la validación de métodos alternativos (registrados) con respecto a un método de referencia
Parte 3: Protocolo para la verificación en un único laboratorio de métodos de referencia y métodos alternativos validados
Parte 4: Protocolo para la validación del método en un único laboratorio
Parte 5: Protocolo para la validación factorial interlaboratorio para métodos no propietarios
Parte 6: Protocolo para la validación de métodos alternativos (registrados) de confirmación microbiológica y procedimientos de tipado microbiológico.

¿Por qué se ha de realizar una verificación de los métodos?

la norma ISO/IEC 17025 establece lo siguiente al respecto:

ISO/IEC 17025 (7.2.1.5) “ El laboratorio debe verificar que puede llevar a cabo apropiadamente los métodos antes de utilizarlos, asegurando que pueda lograr el desempeño requerido. Se deben conservar registros de la verificación. Sí el método es modificado por el organismo que lo público, la verificación se debe repetir , en la extensión necesaria”

¿Qué métodos pueden ser verificados?

La norma ISO 17468. «Requisitos técnicos y recomendaciones para el desarrollo o la revisión de métodos de referencia normalizados», establece 2 etapas antes de que un método pueda ser utilizado en un laboratorio.

Etapa 1. Validación del método. Estudio realizado en un laboratorio seguido de un  estudio de intercomparación (ISO 16140-2, 16140-5, ISO 16140-6). En el caso de métodos validados en un único laboratorio (ISO 16140-4), estos no son seguidos de un estudio de intercomparación

Etapa 2. Verificación del método (ISO 16140-3). Estudio cuya finalidad es demostrar que el laboratorio es capaz de implementar el método validado de manera satisfactoria. La verificación se aplica solo a métodos que han sido validados seguidos de un estudio de intercomparación (ISO 17468, ISO 16140-2, 16140-5, ISO 16140-6)

ISO 16140-3:2021

La norma ISO 16140-3:2021, tiene como objeto la verificación de métodos de referencia y métodos alternativos validados para su implementación en los laboratorios de ensayo. Es de aplicación a la verificación de métodos utilizados para el análisis (detección/cuantificación), confirmación y tipificación de microorganismos presentes en:

✔ Productos destinados al consumo humano
✔ Productos destinados al consumo animal
✔ Muestras ambientales de áreas de producción y manipulación de productos alimentarios para consumo humano o animal.
✔ Muestras procedentes de producción primaria.

El estudio de verificación lo podemos abordar en 3 etapas (Figura 1):

Etapa 1 Seleccionar el método de ensayo a validar (cualitativo/cuantitativo) y definir su alcance de aplicación del laboratorio (categorías, tipos y matrices).

Etapa 2. Evaluar el alcance del método (referencia, alternativo), alcance de validación del método (ej, Afnor, AOAC, otros) y alcance de aplicación del método en el laboratorio.

Seleccionar un número y tipo de muestras a verificar según el alcance (rango) de aplicación del método en el laboratorio (limitado, amplio o amplio + otras categorías).

Etapa 3. Realizar etapas de verificación

3.1. Verificación de implementación. El propósito de esta etapa es demostrar que el laboratorio es capaz de realizar (implementar) el método validado de manera correcta.

✔ Parámetro cualitativo a evaluar: Límite de Detección estimado (eLOD₅₀) según protocolos definidos en la norma.
✔ Parámetro cuantitativo a evaluar: Desviación Estándar de Reproducibilidad Intralaboratorio (S_IR)

3.2. Verificación de matrices alimentarias. El propósito de esta etapa es demostrar que el laboratorio es capaz de analizar correctamente los alimentos (matrices) que declara en su alcance de aplicación. El laboratorio seleccionará alimentos que se analizan habitualmente en el laboratorio, incluyendo los de mayor dificultad.

✔ Parámetro cualitativo a evaluar: Límite de Detección estimado (eLOD₅₀) según protocolos definidos en la norma.
✔ Parámetro cuantitativo a evaluar: Sesgo o Bias estimado (eBias)

Nota: Para los tres niveles de alcance (rangos), etapas y parámetros de verificación, la norma detalla las condiciones, el número de repeticiones que deben hacerse y el número de alimentos a emplear.

Resultados. Obtenidos los valores de desempeño cualitativos y/o cuantitativos, son evaluados frente a los correspondientes criterios de aceptación incluidos en los diferentes apartados de la norma.

En el apartado 7, la norma aborda el protocolo de verificación de métodos de confirmación y tipificación validados, mediante estudios de inclusividad y exclusividad.

En el anexo F, la norma incluye el protocolo de verificación en un único laboratorio de métodos de referencia no validados.