Microorganismos de referencia y control de medios de cultivo y diluyentes (II)

El objetivo principal de los laboratorios que realizan exámenes microbiológicos es el mantener, activar, crecer, detectar o recontar microorganismos diana mediante el uso de medios de cultivo y diluyentes.

Importancia del control de calidad de medios.

La verificación de la calidad y conformidad de los medios de cultivo y diluyentes a emplear en los métodos de ensayo, es un aspecto clave para la obtención de resultados reproducibles y consistentes.
Entre los parámetros de calidad, se evalúa el rendimiento frente a microorganismos de referencia empleados, siendo satisfactorio cuando se comportan de acuerdo a unas especificaciones establecidas (ej. ISO 11133)

Clasificación de medios

Los medios de cultivo se clasifican según su composición, consistencia física, uso y preparación

Tipos de medios disponibles

Los medios de cultivo y diluyentes empleados por el laboratorio han de ser específicos para el tipo de muestra y microorganismos a detectar.

Según su preparación, los tipos de medios a emplear pueden ser:

✔ Medios listos para su uso

✔ Medios preparados a partir de formulas deshidratadas

✔ Medios preparados a partir de componentes individules

Aspectos a tener en cuenta para su preparación

Para su preparación, almacenamiento y uso se han de tener en cuenta las buenas prácticas de laboratorio (BPL), las instrucciones del fabricante y normas de referencia (ej. ISO 11133)

En determinados medios de cultivo se tendrá en cuenta la preparación y adición de suplementos

Garantía de calidad

Los medios de cultivo y diluyentes una vez preparados han de someterse a controles de:
✔ esterilidad (ausencia de contaminación),
✔ físico-químicos (pH, apariencia, color, consistencia,..),
✔ macroscópicos (grosor de medio, uniformidad, retracción..) y
✔ rendimiento (control con microorganismos de referencia)

Los resultados obtenidos han de cumplir las especificaciones del fabricantes y normas de referencia (ej. ISO 11133)
El laboratorio debe realizar un análisis de causas de las desviaciones presentadas durante la preparación de medios y llevar a cabo las acciones correctivas necesarias.

Microorganismos de referencia. Requisitos

Para medios de cultivo, diluyentes y reactivos empleados en aguas y alimentos (normas ISO), se tienen en cuenta las cepas de referencia incluidas en el catálogo WDCM (https://refs.wdcm.org/) y el listado publicado por el grupo de trabajo ISO/TC 34/SC9.

Para otros campos de trabajo (ej. cosmética y productos farmacéuticos), se tendrán en cuenta las correspondientes indicaciones en los documentos normativos de aplicación (ej. normas ISO y farmacopeas)

Proveedores de microorganismos de referencia

Los microorganismos de referencia se obtienen a directamente de las colecciones de cultivo tipo (ej. CECT, ATTCC,..) o de proveedores certificados (ej. ISO 9001)

Formas disponibles de microorganismos de referencia

Según su preparación, homogeneidad, estabilidad, rango de ufc y soporte, se pueden obtener como:
A. Cepa de referencia (ej.cultivos activos, Liofilizados)
B. Material de referencia (MR). Material homogéneo.
C. Material de referencia certificado (MRC). Material con valor medio de ufc e incertidunbre declarada. (ej, lenticulas, biobolas)

Utilización

Los microorganismos de referencia A y B, serán utilizados para la obtención de lote de reserva de referencia, cultivo de reserva y cultivo de trabajo, del cual, se obtendrá la suspension de trabajo (inóculo)
Los microorganismos de referencia del tipo C, se podrán utilizar directamente o previa dilución, como suspension de trabajo (inóculo)

Rendimiento de un medio

El rendimiento de un medio nos indica si todos los microorganismos de ensayo utilizados se comportan conforme a las especificaciones establecidas, en caso de conformidad, el rendimiento sería satisfactorio.

Realización del ensayo de rendimiento

El ensayo de rendimiento se realiza teniendo en cuenta;

✔ la naturaleza del ensayo donde se vayan a emplear los medios de cultivo (cuantitativo o cualitativo),

✔ tipo de medio de cultivo (sólido, semisólido o líquido) y

✔ la carga de inóculo y tipo de siembra a emplear según el tipo de prueba (productividad, especificidad, selectividad)